Vad är HPLC?

Kort svar: HPLC står för högupplösande vätskekromatografi (High Performance Liquid Chromatography). Metoden separerar ett provs beståndsdelar och mäter hur stor andel av materialet som utgörs av målpeptiden. Det är den siffran som anges som "renhet 99,x %" i ett analyscertifikat.

Så fungerar analysen

Provet löses upp och pumpas under högt tryck genom en kolonn fylld med ett poröst material. Olika molekyler binder olika hårt till materialet och lämnar därför kolonnen vid olika tidpunkter. En detektor — oftast UV vid 214 nm, som fångar peptidbindningen — registrerar allt som passerar. Resultatet ritas som ett kromatogram.

Så läser du ett kromatogram

• Retentionstid — hur många minuter det tog för en topp att komma ut. Samma peptid ger samma retentionstid under samma metod.
• Huvudtopp — den stora toppen är målpeptiden.
• Areaprocent — huvudtoppens yta delat med alla toppars yta. Det är renheten i procent.
• Bitoppar — avbrutna kedjor, oxiderade varianter eller rester från syntesen. Få och små bitoppar är tecken på god rening.

Vad HPLC inte visar

HPLC säger hur rent materialet är — inte vad det är. Identiteten bekräftas med masspektrometri, som mäter molekylvikten och jämför den mot den förväntade sekvensen. Bakteriella restprodukter fångas i sin tur av LAL-test för endotoxin. En komplett bedömning kräver alla tre; se peptidkvalitet.

Var hittar jag HPLC-värdet?

I analyscertifikatet för batchen. Hur ett sådant är uppbyggt förklaras i guiden om COA. För Miralys batcher visas HPLC-renheten när du slår upp COA- eller batchnumret på verifieringssidan, och labbrapporten finns länkad direkt på varje produktsida i katalogen.

Vanliga frågor

Är 99 % alltid bättre än 98 %?

Siffran beror på metoden — gradient, kolonn och detektorvåglängd påverkar resultatet. Därför ska metoden alltid stå i certifikatet, annars går två värden inte att jämföra.

Vad betyder RP-HPLC?

Omvänd fas (reversed phase) — den vanligaste varianten för peptider, där kolonnen är opolär och lösningsmedlet polärt.

Kan en peptid ha hög renhet men fel innehåll?

Ja. Ett rent men felaktigt material ger en fin HPLC-kurva. Det är därför masspektrometrisk identitetsbekräftelse behövs vid sidan av renheten.

Informationen är avsedd för forskning och laboratoriebruk. Produkterna är inte läkemedel och inte avsedda för humant eller veterinärt bruk.